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吴琦, 王红宁, 邹立扣, 赵海霞, 刘世贵. 芽孢杆菌植酸酶基因在毕赤酵母中的胞内表达[J]. journal6, 2004, 25(1): 36-41.
WU Qi, WANG Hong-Ning, ZOU Li-Kou, ZHAO Hai-Xia, LIU Shi-Gui. Intracellular Expression of Bacillus Subtilis Phytase phyC in Pichia Pastoris[J]. journal6, 2004, 25(1): 36-41.
根据已知的枯草芽孢杆菌WHNB02 植酸酶phyC 基因全序列设计一对引物, 采用PCR 法从含有该基因的pUC18- phyC 质粒上获得了长约1. 1 kb 不含有信号肽序列的植酸酶phyC 基因表达片段. 经T 载体克隆及序列测定后, 构建毕赤巴斯德表达载体pPIC3. 5K- phyC, 并电转化毕赤巴斯德酵母宿主菌GS115. 经MD 和MM 平板筛选、酶活性测定, 获得了阳性转化子, 并进行了诱导表达. SDS- PAGE 分析表明: 表达产物分子量为42. 01 KD, 表达量占细胞可溶性总蛋白的24%, 并具有植酸酶的生物学活性. 酶学性质分析结果显示: 胞内表达的植酸酶酶促反应最适pH 值为7. 5; 最适反应温度为70 ?? ; 经90 ?? 处理10 min, 残留酶活性42%?? 均优于出发菌株天然植酸酶的相应性质.