Pseudomonas koreensis JDM-2株ACC脱氨酶基因的克隆和表达

journal6 ›› 2011, Vol. 32 ›› Issue (5): 75-79.

Pseudomonas koreensis JDM-2株ACC脱氨酶基因的克隆和表达

（吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南吉首 416000）

出版日期:2011-09-25 发布日期:2012-04-06
通讯作者: 吾鲁木汗·那孜尔别克（1961-），女，新疆塔城托里人，吉首大学生物资源与环境科学学院教授，博士，主要从事微生物学研究．E-mail：ulum@jsu.edu.cn.
基金资助:
国家自然科学基金资助项目（31072142）；吉首大学研究生科研创新项目（JGY201019）

Cloning of ACC Deaminase Gene from Pseudomonas koreensis JDM-2 and Expression in Escherichia Coli BL21

(College of Biology and Environmental Sciences,Jishou University,Jishou 41600,Hunan China)

Online:2011-09-25 Published:2012-04-06

摘要/Abstract

摘要：应用PCR从杜仲内生Pseudomonas koreensis JDM-2株基因组中扩增出ACC脱氨酶基因acdS，将其克隆到pMD18-T载体并段进行DNA测序，通过BamHⅠ和HindⅢ酶切从重组质粒pMD18ACDS中切下acdS基因序列，将其连接到pQE30质粒的BamHⅠ和HindⅢ位点，构建表达质粒pQE30ACDS，转化大肠杆菌BL21，利用比色法测定ACC脱氨酶活力.测序结果表明，JDM-2菌株acdS基因大小为1 017 bp，与已报道不同菌种acdS基因的同源性在86％～99％之间.SDS-PAGE结果显示在大肠杆菌BL21中表达了分子量为38 kDa的ACC脱氨酶.酶活性检测结果显示重组菌ACC脱氨酶的酶活力为0.214 U/mg.

关键词： Pseudomonas koreensis JDM-2, acdS基因, ACC脱氨酶, 表达

Abstract: The acdS gene encoding an ACC deaminase was amplified by PCR from genomic DNA of Pseudomonas koreensis JDM-2,and the PCR product was ligated into the pMD18-T vector and then sequenced.The acdS gene was excised from plasmid pMD18ACDS by double digestion with BanHⅠand HindⅢ,and cloned into the prokaryotic expression vector pQE30 to provide plasmid of pQE30ACDS.The ACC deaminase was expressed in Escherichia coli BL21 harboring the plasmid pQE30ACDS by IPTG induction.The sequence analyses showed that the acdS gene was 1 017 bp in length,DNA homology of the acdS genes between the Pseudomonas koreensis JDM-2 and the previously reported different bacterial strains in GenBank was 86% to 99%.The SDS-PAGE analyses showed a single protein band with a molecular weight of 39 kDa expressed in Escherichia coli BL21,and its enzyme activity was 0.214 U/mg.

Key words: Pseudomonas koreensis JDM-2, acdS gene, ACC deaminase, expression

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